R2A agar
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El documento describe el medio de cultivo R2A Agar, recomendado para el recuento de microorganismos heterótrofos en aguas tratadas. R2A Agar es un medio de bajo contenido nutricional que estimula el crecimiento de bacterias estresadas y tolerantes al cloro. Proporciona instrucciones sobre su uso, composición, almacenamiento, siembra e interpretación de resultados.
R2A agar
- 1. USO Medio de cultivo recomendado por el Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater y por la Farmacopea Euro- pea 6º Edición para el recuento de microorganismos heterótrofos en aguas tratadas. FUNDAMENTO Medio de cultivo desarrollado por Reasoner y Geldreich para el recuento bacteriano en aguas tratadas. Por su bajo contenido nutricional y mediante una incubación pro- longada, estimula el desarrollo de bacterias estresadas, de creci- miento lento y tolerantes al cloro, halladas por ejemplo en aguas tratadas. En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la proteosa peptona Nº 3, la peptona ácida de caseína y la glucosa, aportan los nutrien- tes necesarios para el desarrollo de microorganismos. El almidón y el piruvato de sodio favorecen la recuperación de cé- lulas dañadas. La sal fosfato es la fuente de fósforo y regula el pH, mientras que el sulfato de magnesio aporta los correspondientes iones. El agar es el agente solidificante. CONTENIDO Y COMPOSICIÓN Código B0224705: envase x 100 g. Código B0224706: envase x 500 g. R2A Agar FÓRMULA (en gramos por litro) EXTRACTO DE LEVADURA .......................................................................................0.5 PROTEOSA PEPTONA Nº 3 ........................................................................................0.5 PEPTONA ÁCIDA DE CASEÍNA ...............................................................................0.5 GLUCOSA ...................................................................................................................................0.5 ALMIDÓN SOLUBLE ..........................................................................................................0.5 PIRUVATO DE SODIO ........................................................................................................0.3 FOSFATO DIPOTÁSICO ..................................................................................................0.3 SULFATO DE MAGNESIO ...........................................................................................0.05 AGAR...............................................................................................................................................15.0 pH FINAL: 7.2± 0.2 B0224706 B0224705 INSTRUCCIONES Suspender 18.2 g en 1 litro de agua purificada. Mezclar bien y dejar reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebu- llición para disolución total. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogéneo, libre deslizamiento. Medio de cultivo preparado: color ámbar claro. ALMACENAMIENTO Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC. Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC. PROCEDIMIENTO Siembra Consultar la metodología en el Standard Methods for the Examina- tion of Water and Wastewater sección 9215 A. Se puede sembrar mediante las siguientes técnicas: - Pour plate: inocular 0,1 a 2 ml de la muestra directa o de su dilución. Verter un volumen del medio de cultivo fundido y enfriado a 40-45°C. Homogeneizar mediante movimientos de vaivén y rota- ción. Dejar solidificar. - Diseminación en superficie: inocular un volumen máximo de 0,5 ml de la muestra directa o de su dilución y esparcirla en toda la superficie del agar. Verter un volumen del medio de cultivo fundido y enfriado a 40-45°C. Homogeneizar mediante movimientos de vai- vén y rotación. Dejar solidificar. - Filtración por membrana: el volumen a filtrar dependerá de la probable contaminación de la muestra. Incubación Consultar la metodología en el Standard Methods for the Examina- tion of Water and Wastewater sección 9215 A o en la Farmacopea Europea 6º Edición. En general, podemos detallar:
- 2. CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO Medio sin inocular Sin cambios 02/2021 - REV .02 DIAGNÓSTICO IN VITRO CÓDIGO Nº ELABORADOR ESTÉRIL NºDE DETERMINACIONES LOTE Nº FECHA DE VENCIMIENTO LÍMITE DE TEMPERATURA INSTRUCCIONES DE USO MICROORGANISMOS Bacillus subtilis ATCC 6633 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Escherichia coli ATCC 8739 Staphylococcus aureus ATCC 6538 Farmacopea Europea 6 º Edición Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater TEMPERATURA (ºC) 30 – 35 20 - 28 TIEMPO ÓPTIMO (días) 7 7 TIEMPO MÍNIMO (días) 5 5 CRECIMIENTO Colonias amarillentas anaranjadas Colonias blancas Colonias blancas Colonias blancas Colonias blancas Colonias blanco amarillentas INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Realizar el recuento de colonias y expresarlo teniendo en cuenta la alícuota de muestra sembrada. CONTROL DE CALIDAD Se efectúa por incubación de estos microorganismos a 35-37 ºC durante 48 horas en aerobiosis. LIMITACIONES - El medio de cultivo R2A Agar está recomendado y se utiliza para el análisis de aguas tratadas. - La técnica de pour plate puede afectar el crecimiento y desarrollo de bacterias estresadas debido al shock térmico que puede pro- ducirse al verter sobre la muestra el medio de cultivo esterilizado, fundido y enfriado a 44-46 ºC así como también por la baja tensión de oxigeno que existe durante la incubación. - Se obtiene un mejor desempeño del medio de cultivo al sembrar la muestra mediante la técnica de diseminación en superficie pero en este caso debe sembrarse menor volumen de muestra que por otras técnicas. - Puede requerirse mayor tiempo de incubación que el indicado para lograr mayor recuperación microbiana. - Al ser un medio de cultivo poco nutritivo, el tamaño de colonias es menor para las bacterias de crecimiento rápido. MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requeri- miento. PRECAUCIONES - Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclu- sivo. - No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o da- ñado. - No utilizar el producto si existen signos de contaminación o dete- rioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento. - Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el produc- to. - Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y ma- nipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad establecidas por el laboratorio. - Las características del producto pueden alterarse si no se conser- va apropiadamente. - Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del mismo según reglamentaciones vigentes. REFERENCIAS - Reasoner and Geldreich. 1985. Appl. Environ. Microbiol. 49:1. - Clesceri, L.S., Greenberg A.E., Eaton A.D. 1998. Part 9000, Micro- biological Examination., Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 20th Edition, APHA. - European Pharmacopoeia 6.0, volume 1. 2007. Microbiological Examination of Non sterile products: Test for Specified Microor- ganisms. INDICACIONES AL CONSUMIDOR Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento. Conservar el producto según las indicaciones del rótulo. SÍMBOLOS UTILIZADOS AUTORIZACIÓN ANMAT PM -1292 - 6 Dir. Técnico: Bioq. Alejandro Rossi